рус | укр

Главная

Контакты

Навигация:
Арсенал
Болезни
Витамины
Вода
Вредители
Декор
Другое
Животные
Защита
Комнатные растения
Кулинария
Мода
Народная медицина
Огород
Полесадник
Почва
Растения
Садоводство
Строительство
Теплицы
Термины
Участок
Фото и дизайн
Хранение урожая









Выделение Haemophilus influenzae из клинического материала

Окраска клинического материала по Граму и метиленовым синим. Предварительный диагноз инфекции, вызванной H.influenzae, может быть сделан на основе исследования мазка клинического материала, окрашенного по Граму и/или метиленовым синим.

При окраске по Граму бактерии рода Haemophilus выглядят как мелкие, бледно окрашенные грам(–) палочки, иногда формирующие тонкие филаменты. Небольшие размеры, клеточный полиморфизм и недостаточное прокрашивание сафранином могут существенно затруднять обнаружение гемофильной палочки. Поэтому некоторые авторы предлагают наряду с окраской по Граму проводить окраску метиленовым синим. В этом случае микроорганизмы имеют синий цвет на серо-голубом фоне.

Отрицательные результаты микроскопии не исключают возможности гемофильной инфекции, так как в клиническом материале может присутствовать недостаточное количество микроорганизмов (разрешающая способность световой микроскопии составляет 104–105 бактериальных клеток в 1 мл). Поэтому обязательно культуральное бактериологическое исследование.

Обнаружение капсульного антигена Hib. Для быстрой диагностики инфекций, вызванных H.influenzae типа b, разработаны иммунологические методики обнаружения капсульного антигена в СМЖ, крови, плевральной жидкости и моче: латекс-агглютинация (ЛА), коагглютинация со стафилококковым протеином А (КОА), встречный иммуноэлектрофорез (ВИЭФ) и иммуноферментный анализ (ИФА) [1, 8].

Наибольшее распространение получили ЛА и КОА с образцами СМЖ. Антитела (IgG) против капсульного антигена Hib наносят на частицы латекса (ЛА) или на стафилококковые клетки (КОА) в качестве "носителя". При взаимодействии антигена, содержащегося в клиническом материале, со специфическими антителами менее чем через 10 мин образуются видимые хлопья.

Коммерческие ЛА наборы, доступные в нашей стране, включают: Slidex Meningite H.influenzae b и Slidex meningite-Kit 5 (bioMerieux), Directigen H.influenzae type b Test Kit и Directigen Meningitis Сombo Test Kit (BBL) и Pastorex (Meningitis (Sanofi Diagnostics Pasteur).

Тесты проводятся в соответствии с рекомендациями изготовителей с обязательным использованием положительных и отрицательных контролей. Необходимо помнить, что тесты могут быть ложноположительными, если ребенок был недавно привит Hib вакциной (в течение 21 дня после иммунизации). Кроме того, могут наблюдаться неспецифические ложноположительные результаты при некоторых заболеваниях, не связанных с гемофильной палочкой.

Разрабатываются другие экспресс-тесты для обнаружения H.influenzae (как типа b, так и нетипируемых) в клиническом материале (с помощью моноклональных антител, конъюгированных с иммунопероксидазой, радиоактивно меченые ДНК-пробы и др.).

Однако ни одно из перечисленных исследований не может заменить культуральное исследование, которое остается "золотым стандартом" микробиологической диагностики.

Исследование спинномозговой жидкости. При поступлении образца СМЖ необходимо безотлагательно начать исследование или хранить материал в термостате при температуре 35–37оС или в крайнем случае при комнатной температуре не более 30 мин. Образцы СМЖ не должны помещаться в холодильник!

Длительное хранение образцов может привести к гибели бактерий и ложноотрицательным результатам (за исключением теста на определение антигенов!).

Для увеличения концентрации микроорганизмов рекомендуется центрифугировать СМЖ (не менее 1 мл образца клинического материала 5–15 мин при 1500–3000 об/мин). Надосадочную жидкость следует асептически перенести в стерильную пробирку, после чего тщательно перемешать полученный осадок с помощью многократного пипетирования.

Исследование СМЖ включает следующие диагностические тесты:

1) окраску отцентрифугированного осадка по Граму и/или метиленовым синим. Для этого на поверхность стерильного предметного стекла наносится капля осадка, после высыхания которой добавляется вторая капля, что позволяет увеличить количество бактериальных клеток в мазке. Не следует распределять осадок по большой поверхности, так как это уменьшает вероятность обнаружения микроорганизмов, находящихся в материале в небольшом количестве;

2) определение антигена Hib в надосадочной жидкости. Некоторые авторы считают, что определение антигенов является более чувствительным тестом, чем культуральное исследование у пациентов, получавших антибиотики до забора СМЖ;

3) бактериологическое исследование осадка. Проводится посев нескольких капель осадка СМЖ на поверхность чашек с шоколадным и кровяным агаром, а также в двухфазную или жидкую среду. Чашки инкубируют при температуре 35–37оС в атмосфере с 5–10% СО2.

Другие биологические жидкости (синовиальная, перикардиальная, плевральная) должны окрашиваться по Граму и исследоваться культурально.

Исследование крови. Образцы крови, помещенные во флаконы с двухфазной или жидкой средой, инкубируют в течение 18–24 ч при температуре 35–37оС. Из-за слабого роста гемофильной палочки в жидкой среде может отсутствовать выраженное помутнение среды. Поэтому рекомендуется проводить "слепое" субкультивирование или приготовление и окрашивание мазка через 6–12 ч после начала инкубации из флакона без видимого роста. Предпочтение отдается субкультивированию, так как разрешающая способность световой микроскопии (104–105 КОЕ/мл) незначительно превосходит плотность, при которой становится видимым рост во флаконе (106–107 КОЕ/мл).

Для субкультивирования асептически забирается несколько капель предварительно тщательно перемешанной среды и распределяется по поверхности шоколадного агара. Чашки инкубируются при температуре 35–37оС и 5–10% СО2 в течение 24–48 ч.

После промежуточного субкультивирования следует продолжить инкубирование флаконов. Через 24 ч инкубации независимо от отсутствия или наличия мутности во флаконе следует приготовить мазок.

Результаты микроскопии следует немедленно сообщать лечащему врачу. Если имеется видимое помутнение среды даже при отрицательном мазке или положительный мазок при отсутствии мутности, то следует субкультивировать материал на шоколадном агаре и КА.

Исследование материалов, содержащих микробные ассоциации (мокрота, материал из среднего уха и пазух носа и т.д.). Перед посевом полученного клинического материала рекомендуется проводить микроскопическое исследование окрашенных мазков. Это позволяет получить предварительные данные о возможных возбудителях, а также оценить качество материала (мокроты).

Оценка качества мокроты позволяет повысить эффективность микробиологического исследования и снизить расходы лаборатории. Критерием пригодности мокроты для бактериологического исследования является наличие более 25 сегментоядерных лейкоцитов и не более 10 эпителиальных клеток в поле зрения при просмотре не менее 20 полей зрения мазка, окрашенного по Граму (при увеличении x 100).

Для улучшения выделения гемофильной палочки рекомендуется использовать среды, содержащие бацитрацин (300 мкг/мл) или диски с бацитрацином (10 ЕД), или сапонинобацитрациновые диски.

Таблица 3. Дифференциально-диагностические свойства рода Haemophilus

Вид Потребность Ката- лаза Окси- даза ONPG Гемо- лиз* Образование кислоты из
в Х и V фак- торах в СО2 гл сх лз мн
H.influenzae X, V + + + - - + - - -
H.influenzae биовар aegypticus X, V - + + - - + - - -
H.haemolyticus X, V - + + + + + - - -
H.parainfluenzae V - v + + - + + - +
H.parahaemolyticus V - + + v + + + - -
H.aphrophilus h + - - + - + + + +
H.paraphrophilus V + - + + - + + + +
H.segnis V - v - v - w w - -
H.ducreyi X - - - - - - - - -

Таблица 4. Биотипирование H.influenzae

Биотип Индол Уреаза ОДК*
H.influenzae I + + +
H.influenzae II + + -
H.influenzae III - + -
H.influenzae IV - + +
H.influenzae V + - +
H.influenzae VI - - +
H.influenzae VII + - -
H.influenzae VIII - - -

 

Просмотров: 212

Вернуться в категорию: Болезни

© 2013-2017 cozyhomestead.ru - При использовании материала "Удобная усадьба", должна быть "живая" ссылка на cozyhomestead.ru.